盐酸克伦特罗残留检测（精选8篇）
盐酸克伦特罗残留检测 第1篇
食品与发酵工业 Food and Fermentation Industries
动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精残留危害 及其检测方法研究进展 张清安 范学辉(陕西师范大学食品工程系,西安,710062 摘 要 介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精的理化特性,分析了它在动物性食品中残留对人体和国民 经济所造成的危害,同时又综述了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精的各种分析检测方 法并作了展望。关键词 动物性食品,盐酸克伦特罗,残留,检测方法 第一作者:硕士,讲师。收稿时间:2004-06-22 1 盐酸克伦特罗的理化特性及药用机 理 1.1 盐酸克伦特罗的理化特性 盐酸克伦特罗(clenbuteerol ,CLB ,又名克 喘素、氨哮素、双氯醇胺,俗名瘦肉精,化学名为 α2[(叔丁氨基甲基]242氨基23 , 52二氯苯甲醇 盐酸盐,分子式为C12 H18 Cl12 N2O·HCl ,相对分 子质量为313165。它是一种选择性β2肾上腺 素受体激动剂,白色或类似白色的结晶体粉末, 无臭、味微苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于氯 仿,不溶于苯和乙醚,化学性质稳定,加热到 172℃才开始分解,经260℃油煎5 min才会破 坏减半[1 ,2 ]。口服后在胃肠道中迅速吸收,10～20 min起效,2～3 h血液浓度达到峰值,作用 维持5 h左右,半衰期为25～39 h ,消除5个半 衰期(消除97 % ,约需5～8 d ,在动物眼睛、毛 发、肝、肺、肾等组织中易引起蓄积[3 ]。112 盐酸克伦特罗的药用机理 盐酸克伦特罗(CLB于1964年首次在美 国合成,属于β类兴奋剂,最初在临床上主要用 于防治人、畜支气管哮喘和痉挛。研究证明作 为药物CLB对呼吸、生殖、泌尿、骨骼、神经等 系统疾病具有较好治疗作用。其机理在传出神 经系统,β受体主要分布于血管、支气管、骨骼 肌和平滑肌等部位,盐酸克伦特罗与β受体选 择性结合后,使β2受体出现兴奋效应,主要表 现为平滑肌舒张、通气改善等[ 4 ]。1984年美国(> 1μg/ kg· 明显促进动物生长、改善胴体品质、提高瘦肉 率,于是欧美等国开始将CLB广泛用于动物饲 一家公司意外发现高于治疗剂量5～10倍以上 d CLB添加于饲料饲喂动物后,可 料[5]。20世纪 80年代后期 ,我国部分大专院 校和科研机构也开始向饲料企业和养殖户推广 该物质作为饲料添加剂使用。由于 CLB能使 饲料转化率和瘦肉率提高 10 %～15 %,骨骼肌 脂肪降低 8%～15 %,所以养殖户和饲料企业 经常把 CLB叫作“瘦肉精”或“肉多素”。其提 高瘦肉率机理在于 CLB通过肾上腺素刺激腺 苷酸环化酶的合成 ,从而升高环磷酸腺苷(cAMP的浓度 ,提高激素敏感脂酶的活性 ,加 快脂肪分解 ,使血液中游离脂肪
酸(FFA进入 肌肉量增加 ,进一步为蛋白质的合成提供物质 基础;同时 ,CLB作为一种植物性神经调节剂 , 可降低血液中抑制肌肉兴奋性的 Mg2 +浓度 , 间接促进肌肉兴奋 ,改变细胞膜的通透性 ,参与 机体内的代谢调控及营养重新分配 —— ——抑制蛋 白质的分解和脂肪的合成 ,进而增加氮的组织 沉积[6]。2 动物性食品中盐酸克伦特罗的残留 危害 211 动物性食品中盐酸克伦特罗的残留 108
2004 Vol.30 No.9(Total 201 分析与检测 由于盐酸克伦特罗在动物生产中有明显的 促生长和提高瘦肉率的作用 ,受此利益驱使国 内外 CLB在养殖业中滥用问题非常严重。又 因 CLB在生产中的用量是治疗量的 5～10倍 , 而且持续添加时间(3周以上 和在体内消除半 衰期(25～39h都很长 ,所以极易在动物组织中 蓄积残留 [6]。在机体的各个组织中 ,CLB在眼 和毛发中残留的浓度最高 ,如眼中 CLB残留量 比血浆中浓度高 107倍。原因是 CLB对不同 组织有选择性 ,首先选择有色素沉着的眼组织 和毛发组织沉积 ,且在眼组织中主要结合在有 色素沉着的视网膜和脉络膜上 ,而在无色素的 眼的其他部位则蓄积较少。除了眼和毛发 ,其 他器官的残留情况是:肺、肝、肾约为血浆浓度 的20～90倍,肌肉和脂肪为3～15倍。如果在 屠宰前没有休药期,则残留量将更高[6 ,7 ]。早在1987,欧盟、美国已宣布禁止使用 今世界范围内已有数以千计甚至万计因食用残 留有瘦肉精的动物源食品而中毒的人员。人食 用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉 兴奋性增强,有的人中毒后表现为肌肉震颤,重 症者腓肠肌痉挛;同时引起心肌收缩加强,心率 加快[8 ];对高血压患者危害更大, CLB分解脂 肪成游离脂肪酸进入血液,使血管壁弹性降低, 引起血压升高,微循环血管膨胀,压迫刺激周围 的神经,引起头痛头晕;引起人内脏横纹肌和平滑肌兴奋性增强,表现为呕吐和腹泻;又因体内 K+、Ca2 +、Na +和Mg2 +等浓度的平衡破坏,导 致细胞膜生物电位去极化能力增强,复极化能 力减弱,细胞膜对离子通透性改变,心电图可呈 “T波倒置或底平”, ST段下移等,若患者发生 死亡,则死于心脏舒张期或心肌梗死。CLB中 毒的患者群中,对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲 状腺亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生 CLB作为兽用饲料添加剂我国政府也于,1997 年在“浓牧发 [1997 ]3号《关于严禁非法使用兽 药的通知》 ”中已明确禁止其在饲料中添加使 用。但也有许多国家并没有确定动物性产品中 CLB的最大残留限量(MRL。美国
食品药物 管理局(FDA和世界卫生组织(WHO建议盐 酸克伦特罗在动物组织中最高残留限量为 :肉 012μg/ kg、肝 016μg/ kg、肾 016μg/ kg、脂肪 012μg/ kg、乳 0105μg/ kg;部分欧盟成员国如英 国规定可食性组织中 MRL值为 015μg/ kg ,荷 兰规定牛、马肝脏组织中 MRL值 015μg/ kg[8]。212 动物性食品中盐酸克伦特罗的残留危害 虽然盐酸克伦特罗的毒性并不是很强 ,小 鼠、豚鼠静脉注射的半数致死量分别是每公斤 体重 2716 mg和 1216 mg[2]。但是由于它的半 衰期长 ,在体内代谢慢 ,极易蓄积残留于动物体 内 ,在动物肝脏中 CLB平均浓度可达 45 mg/ kg ,也就是说 ,按临床最高治疗剂量每天 018 μg/ kg计算 ,人食用 100 g被 CLB污染的动物 肝脏摄入体内的 CLB就相当于一次治疗剂量 的 10倍以上 ,因而极有可能通过食物链使人体 中毒而对健康构成威胁 [9]。自上世纪 80年代 中期欧美国家发现瘦肉精的毒副作用以来 ,至 命的恶果。孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸 的严重危害性 [ 10 ,11 ]。欧盟成员国已将 CLB残 留作为肉品进口必检项目 ,因而这也成了 WTO成员国之间进行国际贸易的技术壁垒。由此可见 ,CLB的非法使用及残留不但严重地 威胁着消费者的健康 ,而且也影响着一个国家 的对外贸易和声誉。我们应借鉴美国、欧盟等 国家在动物产品生产和食品工业上实施的良好 生产规范(GMP、危害分析与关键控制点(HACCP和全过程质量控制(IKB等管理经 验 ,并结合我国动物产品生产的特点 ,引入全过 程质量控制的新理念 ,加强养殖、屠宰加工和销 售环节的质量管理 ,减小甚至消除 CLB残留造 成的危害 [12 ]。3 动物性食品中盐酸克伦特罗的检测 方法
当前 ,造成盐酸克伦特罗屡禁不止的原因 之一就是国内外检测 CLB的方法、手段还不完 善 ,还没有建立宰前监测体系和准确、迅速、方 便、精确的检测方法 ,从而使不法分子有机可 乘。目前国内外用于检测动物性食品中盐酸克 伦特罗的方法主要有以下几种。109 2004年第 30卷第 9期(总第 201期
分析与检测 国已将 HPLC法作为检测饲料中 CLB残留的 半确证法 ,将 GC2MS法定为确证性方法 ,主要 用于最后确认和仲裁 ,而对于动物性食品中 CLB残留尚未有检测标准。HPLC法中常用的 检测器有电化学检测器、紫外检测器;HPLC法 优点是检测精确度高 ,其最低检测限范围为 1～15 ng/ g ,而且假阳性率低 ,与 GC2MS法相 比样品不必衍生;缺点是检测过程烦琐、检测时 间长 ,需贵重仪器、难
于操作、价格昂贵 [18 ]。GC2MS法优点是能在多种残留物同时存在情 况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。与 HPLC相比 , GC2MS法灵敏度更高 ,假阳性 率更低 ,其缺点也同 HPLC法一样。CE法非 常适用于难以用传统的液相色谱法分离的离子 化样品的分离与分析。优点是有很大的灵活 性 ,许多分离参数 ,如缓冲液的组成和 pH值 , 毛细管的类型以及所使用的电场的波形都可以 调节 ,操作简便 ,所需样品量极少 ,一般只需几 纳升。缺点是检测时间仍很长 ,不能满足在线 检测 ,仪器复杂、缺乏配套的检测器 [19 ]。((TLC [4 ,12 ,15～17 ] GC2MS、毛细管区带电泳法。其中前3种方法最常用,中、薄层色谱法F TIR 2GC((CE、高效液相 傅立 的 R2biopharm公司分别开发出了检测肉品、饲 色谱 2质谱联用法
(HPLC2MS、气相色谱 2料中 CLB残留的 EL ISA试剂盒 ,但其价格费 叶红外联用法 用极高 ,每检测一份猪肉是否含 CLB的费用是 1 200～1 400元。正因如此 ,国内许多科研院 311 感官识别 [ 13 ,14 ] 凡饲喂盐酸克伦特罗比较严重的猪宰后肉 色特别鲜红、后臀肌肉饱满突出 ,脂肪非常薄 , 肉皮紧贴着瘦肉、瘦肉纤维比较疏松 ,肉皮与瘦 肉之间无肥肉(肥膘厚度不到 115 cm ,有时有 少量“汗水”渗出肉面 ,这种肉就很可能含有 CLB;而一般健康肉淡红色 ,肉质弹性好 ,也不 会有 “出汗”现象。通过这种感官识别方法就可 以快速、简单、定性对动物性食品中有无 CLB 作出初步判定。312 色谱检测技术 目前 ,检测 CLB残留常用的色谱技术有高 效液相色谱(HPLC、气相色谱 2质谱联用法 313 免疫分析技术(IA 标记免疫分析技术是 “迈向 21世纪的医学 检验技术”之一 ,其发展趋势是 :新标记物的发 110
2004 Vol.30 No.9(Total 201 展与联合应用、单克隆以及基因工程抗体的应 用和免疫放大技术 ,可明显提高检测特异性 ,灵-敏度可达 zepto(10-20、yocto(10 24 水平,即 可实现分子水平的检测 [20 ]。目前 ,用于检测 CLB残留的免疫分析技术主要有放射免疫分 析技术(RIA和酶免疫分析技术(EIA。国外 已生产出运用 RIA测定 CLB残留的试剂盒 , 还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析 法 ,这种方法是用受体代替抗体结合 CLB ,检 测限可达 214 ng/ g ,国内在此方面的研究尚属 空白 [21～23 ]。对于 EIA分析技术中检测 CLB 残留较高效的是酶联免疫吸附技术(EL ISA。目前 ,英国的 Randox Laboratories Ltd和德国 所都在开发研制检测 CLB残留的 E
L ISA试剂 盒。据报道 ,中国疾病预防控制中心营养与食 品安全研究所和上海市畜牧兽医站与上海赛群 生物科技有限公司联合开发研制的瘦肉精 EL ISA检测试剂盒也已分别问世 ,且后 2家单 位联合开发产品已投入商品化生产及实际应用 中。经与同类进口试剂进行对比试验 ,结果显 示国产试剂盒在灵敏度、准确性上都已达到进 口试剂盒的水平,而在稳定性、回收率方面要优 于进口试剂盒 ,且价格费用要下降很多 [24 ]。EL ISA的优点是灵敏度高、操作简便、检测迅 速;缺点是仍不能实现在线检测 ,而且假阳性率 较高。314 综合化学法 根据 CLB的化学结构与性质 ,参照国家药 典标准方法可以进行综合鉴别 [25 ]。因其溶于 水和乙醇 ,故可以用水进行提取。CLB可显示 芳香一胺类的鉴别反应 ,也可以显示氯化物的 鉴别反应 ,同时 ,用分光光度计检测 ,可在 243 nm与 296 nm的波长处得到最大吸收。综合分 析可以判定动物性食品中是否存在 CLB类物 质 ,且该法不需昂贵的仪器与试剂 ,也没有复杂 的样品前处理 ,操作简单 ,无疑是基层卫生防疫 分析与检测 CLB的高效在线检测 [15 ] 原理为当分子识别部分与被识别物质相接触 光变化以及直接 诱导电信号 ,而后利用电学测量方法进行检测、控制和显示输出。国外已有用生物传感器技术 检测 CLB残留的资料报道 [26] ,其优点是特异 性强、假阳性率低、高效、方便 ,国内未见有开发 成功的相关报道。总之 ,尽快研制出高效、方 便、迅速的 DIGFA试纸条和生物传感器是检 测 CLB残留较为理想的方法和途径 ,也是今后 发展趋势。及准确度均很理想。如果研制出检测。对于生物传感器,其 时,可发生化学变化、热变化、CLB的13 闫红军,马巧娥.提高卫生知识水平严防 中毒[J ].动物医学进展,2003 ,24(5 :127 “瘦肉精” 滴金免疫试纸条或滴金免疫测试盒则可实现 14 李 杰.瘦肉精残留危害与动物性食品安全 [J ].中国饲料 ,2003 ,4 :31～32 工作者初选 CLB残留的有效方法 ,但最低检测 限较高 ,灵敏度低。4 盐酸克伦特罗检测技术的未来趋势 和发展方向
根据目前国内外检测 CLB各种方法的进 展情况以及 CLB滥用及残留的严峻性 ,建立一 种克服上述各种检测方法缺点的简便、快速、精 确、可实现在线检测的 CLB技术势在必行。滴 金免疫技术(DIGFA 和生物传感器技术(biosensor ,BS是 2种快速、高效的残留物分析 技术。其中 DIGFA技术已成功的运用于早孕 诊断、弓形虫病诊断、血吸虫病诊断等 ,灵敏
度 参考文献 1 张琪玉 ,李海云 1盐酸克伦特罗中毒 40例分析 [J ]1中国医师杂志 ,2002 ,4(9 :1 035～1 036 2 蒋巧燕 1盐酸克伦特罗中毒 11例分析 [J ]1医学理 论与实践 ,2002 ,15(4 :434 3 陈永壮 “瘦肉精”中毒的流行病学特征及防治对策 1 [J ]1中国卫生监督杂志 ,2002 ,9(5 :280～281 4 刘国艳 ,柴春彦 1如何全面认识 “瘦肉精” [J ]1动物 科学与动物医学 ,2002 ,19(6 :1～3 5 Elliott C T , Mccaughey W J , Crooks S R H et al1Residues of clenbuterol in cattle receiving therapeu2 tic doses:Implicationsfor differentiating between legal and illegal use[J ]1 Vet Q ,1995 ,17 :100～102 6 凌明亮 ,黄仁术 1瘦肉精的危害及检测方法 [J ]1安 徽农学通报 ,2003 ,9(4 :87～88 7 Sauern M J ,Pickett R J H ,Limer S et al1Distribution and elimination of clenbuterol in tissues and fluids of calves following prolonged oral administration at a grow-promoting dose[J ]1J Vet Pharmacol Therap , 1995 ,18 :81～86 8 林荣泉 1瘦肉精对人的危害及防治 [J ]1肉类工业 , 2002 ,7 :30～31 9 张 玲 ,邵春花 1瘦肉精的危害及其预防措施 [J ]1新疆农垦科技 ,2003 ,6 :19～20 10 汪令四 1含“瘦肉精”畜产品对人体健康的危害 [J ]1畜牧兽医杂志 ,2002 ,21(4 :29～30 11 张 呤 ,陈一农 1克伦特罗药理作用的研究进展 [J ]1海峡药学 ,2002 ,14(5 :10～11 12 宋兴国 ,陈 杰.瘦肉精的快速检测方法 [J ].山东 畜牧兽医 ,2003 ,3 :28～29 15 黄传峰 ,李晓华 ,吴宜群.克伦特罗检测方法进展 [J ].中国卫生检验杂志 ,2002 ,12(5 :634～636 16 黄宏南 ,谢剑峰.盐酸克伦特罗(瘦肉精 的检测方 法进展 [J ].福建畜牧兽医 ,2003 ,10 :27～28 17 蔡玉枝 ,罗晓燕 ,苏文周.高效液相色谱法测定猪 组织中盐酸克伦特罗残留量 [J ].中国卫生检验杂 志 ,2002 ,12(2 :193～194 18
Miyazaki T , Nakajima T , Hashimoto T et al.Deter2 mination of clenbuterol in animal tissues by high per2 formanceliquidchromatography[J].J FoodHygSo2 ciety of Japan , 1995 ,36(2 :269～273 19 Giancarlo B , Robert A , Pietro T et al.Positive chemical ionization and tandem mass spectrometric fragmentation for the gaschromatographic analysis of β2agonists using the ion trap technique [J ].JMass Spectrum ,1999 ,34 :1 346～1 353 20 刘国艳 ,柴春彦.动物性产品中盐酸克伦特罗(瘦 肉精 检测方法研究进展 [J ].动物科学和动物医 学 ,2002 ,19(4 :32～34 21 Polettini A J , Segara G，Gonzalez X et al.Clen2 buterol andβ-adrenergic drugs detected in hair of treated animals by ELISA [J ].Clin Chem , 1995 , 41 :945～946 22 Sawya W N , Lone K, H usain A et al.Screening forβ2 Agonists in sheep urine and eyes by an enzyme2linked immunosorbent assay in the state of Kuwait [J ].Food Control , 2000 ,11 :1～5(下转第 119页 111 2004年第 30卷第 9期(总第 201期
分离与提纯 表 3 不同抗氧剂对猪油的抗氧化 作用(POV值 mmol/ kg 样 品 时间 /d 0 48 013 %提取液 01062 01068 01287 013 %抗坏血酸 01062 01089 01301 013 %柠檬酸 01062 01132 01413 013 %EDTA 01062 01066 01279 3 结 论 比较了几种不同提取方法的提取效果 ,实 验显示 :体积分数 75 %乙醇提取法提取率较 高 ,提取物比较容易浓缩和干燥 ,是一种较好的 提取方法。柿叶黄酮类化合物的抗氧化性较强 ,通过 对猪油的抗氧化效果试验发现 :其抗氧化效果 比抗坏血酸和柠檬酸稍强。参考文献 1 谭仁祥 1植物成分分析 [M]1北京 :科学出版社 , 2002.486～502 2 万素英 ,赵亚军 ,李 琳等 1食品抗氧化剂 [M]1北 京 :中国轻工业出版社 ,1998 Study on Extraction Method and AntiSong Changchun Bao Qingsheng(Department of Basic Courses , Anhui Technical Teachers College , Bengbu , 233100 2oxidation Property of Flavonoid Compound from Leaves of Diospyros kaki ABSTRACT The extraction method of flavonoid in leaves of Diospyros kaki was studied1 The opti2 mum extracting process was put forward , and anti2oxidation property of the extract from the leaves of Diospyros kaki was studied1 The results showed that the optimum extracting technical process was 75 % alcohol1 Effect of flavonoid from the leaves of Diospyros kaki was higher than ascorbic acid and citric acid1 Key words leaves of Diospyros kaki , flavonoid ,extraction method ,antioxidant(上接第 111页 和国药典 [M].北京 :化学工业出版社 ,1995.62923 彭笑蓉 ,孙文梅.竞争酶标免疫法检测“瘦肉精” ～630 [J ].河北畜牧兽医 ,2003 ,19(4 :42～43 26 Pizaariello A , Stred’ansky M , Stred’ansky S et al.24 张苏华 ,黄士新.国产“瘦肉精” EL ISA试剂盒与A Solid binging matrix/ molecularly imprinted poly2 同类进口试剂盒的对比试验 [J ].上海畜牧兽医通mer-based sensor system for the determination of 讯 ,2003 ,4 :20～21 clenbuterol in bovine liver using differential-pulse 25 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共
voltametry [J ].Sensors and Actuators B ,2001 ,76 : 286～294 Hazard of Clenbuterol Residual in Animal Food and Research Progress on Its Determination Method Zhang Qing’an Fan Xuehui(Department of Food Engineering ,Shaanxi Normal University , Xi’an , 710062 ABSTRACT In this paper we introduced the physicochemical characteristics and mechanism of clen2 buterol ,analyzed its hazard to human health and national economy , and summarized testing methods of residual clenbuterol in animal food1 Key words animal food ,clenbuterol ,residual ,determination method 119 2004年第 30卷第 9期(总第 201期
盐酸克伦特罗残留检测 第2篇
猪尿中克伦特罗残留的ELISA检测研究
对自主开发研制和德国r-Biopharm公司的β-兴奋剂酶联免疫(ELISA)试剂盒的标准曲线线性范围、斜率、B/B0抑制浓度、板内变异系数、板间变异系数、阳性检出率、回收率和交叉反应率等进行了比较试验.结果表明:自制试剂盒的线性范围为0.3～8.1 ng/ml时,50%抑制率浓度IC50的平均值为0.93 ng/ml;板内变异系数小于2.2%;板间变异系数小于13.8%;样品回收率为85%～96%;实际样品检测和德国r-Biopharm公司的.试剂盒阴阳性符合率100%;与克伦特罗和甲基克伦特罗交叉反应率均为100%,与沙丁胺醇和特布他林的交叉反应率分别为88%和86%.
作 者：李艳 张明洲 陈宗伦 刘军 胡华军 LI Yan ZHANG Ming-zhou CHEN Zong-lun LIU Jun HU Hua-jun 作者单位：中国计量学院,生命科学学院,浙江,杭州,310018刊 名：浙江农业学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS年，卷(期)：18(5)分类号：Q852.4 Q859.7关键词：克伦特罗 β-兴奋剂 ELISA试剂盒 猪尿
盐酸克伦特罗残留检测 第3篇
盐酸克伦特罗 (Clenbuterol, CLB) 俗称瘦肉精, 又名氨哮素、克喘素, 化学名为“4氨基-α-[ (叔丁基氨基) 甲基]-3, 5-二氯苄醇盐酸盐”, 常温下为白色或微黄粉末状固体, 熔点为170℃~176℃, 极易溶于水、甲醇和乙醇, 微溶于氯仿, 不溶于苯, 是一种β2一肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末, 美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。80年代, 由于盐酸克伦特罗能促进猪生长, 提高瘦肉率, 而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。但是近年来, 因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生, 且后果极其严重, 引起了世界各国的高度重视, 为了保证猪肉产品质量安全, 保护人类健康, 许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。
2 危害性
2.1 对猪的影响
在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。后期会使猪体内糖降解作用不足, 导致猪肉品质下降, 同时容易发生蹄损伤和跛行, 大运动量或高温条件会造成死亡。
2.2 对人的影响
人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用, 出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状, 特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大, 严重的可导致死亡。
3 国内外对盐酸克伦特罗的禁用规定
由于盐酸克伦特罗对猪具有加强脂肪分解, 促进蛋白质合成, 实现动物营养再分配, 提高胴体瘦肉率, 加快猪的生长等作用, 盐酸克伦特罗曾作为科研成果推广, 从而使多起摄入残留“瘦肉精”的消费者中毒案件发生, 严重的甚至导致了死亡。就国内而言, 自1998年以来, 每年都有数起类似中毒事件发生。今年双汇“瘦肉精”事件更是引起了广泛的关注。从1986年开始, 欧美等发达国家已严禁畜牧生产中应用盐酸克伦特罗, 我国农业部在1997年3月以[农牧发 (1997) 3号文]严令禁止β一肾上腺素类激动剂在动物生产中的应用。美国食品药物管理局 (FDA) 和世界卫生组织 (WHO) 建议CLB在动物组织中最高残留限量 (MRL) 分别为肉0.2μg/kg, 肝0.6μg/kg, 肾0.6μg/kg, 脂肪0.2μg/kg, 奶0.05μg/kg。
4 残留检测方法
4.1 感官辨别
屠宰前, 凡呼吸急促, 皮毛异常光亮, 后臀部外形饱满且突出, 四肢严重颤抖或非外因而卧地不起的猪, 基本上可以做出初步判断。屠宰后, 可以从肉的品质和颜色上来判断。含有盐酸克伦特罗的猪肉肉色较深, 鲜艳, 脂肪层非常薄, 在胴体两侧腹股沟的脂肪层内毛细血管分布较密, 甚至呈充血状态。内脏实质器官 (心、肝、肾) 充血肿胀, 用手指触之酥软呈脂肪变性, 间质器官如肺、气管切面见泡沫、气肿等病变特征, 而一般健康肉呈淡红色, 肉质弹性好。感官检验法可用于对含有盐酸克伦特罗动物性产品的粗略判断, 主观性较强[2]。
4.2 实验室检测
目前对猪体内盐酸克伦特罗残留的检测方法主要有胶体金法、酶联免疫法、气相色谱法及液相色谱-质谱联用法。
4.2.1 胶体金法
胶体金法是通过盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗-血清白蛋白偶联物竞争结合抗盐酸克伦特罗单克隆抗体-胶体金复合物, 使试纸上反应线颜色发生变化, 以判定样品中盐酸克伦特罗的含量。当检样中盐酸克伦特罗浓度低于最低检测水平时, 胶体金中的抗盐酸克伦特罗单抗-胶体金复合物与T线上的偶联物结合, T线呈色与C线相近;当检样中盐酸克伦特罗浓度>0.5ng/m L时, T线显色比C线浅或完全看不到线, 且盐酸克伦特罗浓度越高T线显色越浅, 从而作出判定[3]。在筛查饲养场、生猪中转站、屠宰场时可采用胶体金法进行快速检测, 不须添置任何设备, 不须掌握更多专业技能, 在十多分钟内即可得到检测结果, 适用于大量样品的测定, 缺点是假阳性率较高。
4.2.2 酶联免疫法
酶联免疫法是微孔板加入盐酸克伦特罗抗体, 经过孵育及洗涤步骤后, 加入盐酸克伦特罗酶标记物、标准和样品溶液。盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗酶标记物竞争, 盐酸克伦特罗抗结合的盐酸克伦特罗酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质和发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入终止液后由蓝色转化为黄色, 在450nm处测量吸光强度, 吸光值与样品中盐酸克伦特罗浓度呈反比[4]。目前, 国内用于盐酸克伦特罗残留检测的试剂盒已经商品化, 具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点, 适于批量样品的快速分析测定.检测精度可达ng/m L级, 此法假阳性率较少, 因此国内外大都将胶体金法作为筛选法。
4.2.3 气相色谱法[5]
气相色谱法是将样品经固相萃取、衍生化后用ECD检测器检测, 以外标法多点校准定量, 测得动物组织中盐酸克伦特罗的峰面积与样品浓度在0.005~1.0μg/ml范围内呈良好的线性关系, 相关系数大于0.999, 肉样的加标回收率在70%~80%, 最低检出限为1μg/kg。气相色谱法具有检测精密度高的优点, 但同时也具有检测过程烦琐, 耗时长、不能定性等缺点。
4.2.4 液相色谱-质谱联用法
液相色谱-质谱联用法是猪尿及猪肉组织中B-兴奋剂残留量的液相色谱-串联质谱联用测定法, 检测的定量限在0.15~0.6ng/g, 线性范围均大于10, 线性方程的相关系数大于0.999, 猪肉样品和猪尿的回收率大于70%。该法具有灵敏度高、专属性强、定性准确的优点。由于此方法不需要对样品进行衍生化就可直接分析, 操作步骤相对简单、灵敏度高、专属性强、定性准确的优点, 所以也在盐酸克伦特罗残留的测定中逐步得到应用[6]。
综上所述, 在各种检测方法中, 胶体金法不需要添置任何设备, 不需掌握更多专业技能, 短时间内即可得到检测结果, 但假阳性率较高, 可作为现场速测使用。酶联免疫法作为一种最常用的免疫分析法, 具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等特点, 适合于大批量样品的快速分析, 但不能作为确证方法。而气相色谱法和液相色谱-质谱联用法虽然提高了分析的灵敏性、准确性和有效性, 降低了检测限, 但均需要昂贵的仪器、复杂的样品处理程序以及专门的操作技能, 且比较费时, 成本高, 不适合用于大批量样品的检测。因此灵敏, 快速、方便的检测方法是今后研究和开发检测盐酸克伦特罗残留物的重要方向。
摘要：本文介绍了盐酸克伦特罗 (瘦肉精) 的性质、危害性以及主要的检测方法。
关键词：盐酸克伦特罗,残留,检测方法
参考文献
[1]刘国艳, 柴春彦.如何全面认识“瘦肉精”[J].动物科学与动物医学, 2002, 19 (6) :1～3.
[2]李慧, 刘士杰, 苏晓鸥.盐酸克伦特罗在猪尿液中消长动态研究[J].中国畜牧兽医, 2005, 32 (9) :35～36.
[3]杨新刚.猪尿液中盐酸克伦特罗检测方法比较[J].当代畜牧, 2006, 7:45～46.
[4]雷红涛, 高秀洁, 潘科.盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫检测方法的建立[J].中国食品学报, 2006, 6 (1) :6～10.
[5]谢维平, 黄盈煜, 胡桂莲.气相色谱法直接测定动物组织中盐酸克伦特罗的残留量[J].色谱, 2003, 21 (2) :l92.
盐酸克伦特罗残留检测 第4篇
【关键词】盐酸克伦特罗;瘦肉精;感观识别;检测方法
盐酸克伦特罗(clnebuetorl，CL)的化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种具有扩张支气管作用的β-2兴奋剂。由于其能明显增加畜牧业生产中的瘦肉率，因此，成为民间俗称瘦肉精的主要存在形式，并被不法分子应用于生猪生产中。人一但食用含瘦肉精残留的肉制品就会产生不良反应，严重的还可能会因中毒而导致昏迷，甚至死亡。因此，加强对含盐酸克伦特罗的畜肉的识别与检测，对于捍卫食品安全，保障人民健康具有十分重要的现实意义。
1.通过感官对盐酸克伦特罗进行识别的方法
生猪屠宰前饲食盐酸克伦特罗的外观与体态具有以下特征：生猪肤色白里泛红且较为光洁，臀部结实上翘、腹部无下坠感，整体体态更为美观。但可能同时也会出现呼吸急促腿脚无力，导致站立不稳或爬坡有困难，蹄部较易受伤并发生感染。在运输过程中，前后肢还较易发生劈叉现象，剧烈运动还易导致死亡。
生猪在屠宰后，也可以通过肉的品质与颜色对是否含有盐酸克伦特罗进行判断。如果饲喂盐酸克伦特罗较为严重的话，猪肉肉色就相对较深，皮下肥膘非常薄几不可见；后臀肌肉更加饱满且肉质鲜艳；膈肌较厚，大肠、小肠壁薄，冠油少板油薄。当猪肉具有这些性状的话，通常可怀疑饲喂了盐酸克伦特罗。
通过感官对动物性食品中盐酸克伦特罗进行识别主观性较强，因此，只是粗略的判断方法。可以做为消费者购买猪肉，或者肉制品生产质控人员避免使用含盐酸克伦特罗鲜肉进行参考。
2.盐酸克伦特罗的快速检测
目前，要快速对盐酸克伦特罗进行检测，试纸条法是最合理的选择。使用试纸条检测需根据产品的说明书进行。具体方法如下：
2.1准备检测样品
将备检尿液放置室温内，待回升至20～24℃时，2000g离心10 min后，取上清尿液用于检测。
2.2检测具体步骤
2.2.1在检测板孔中分别加入标准品1、标准品2及待检尿液80μg。
2.2.2把加入样品的检测孔板条平行黏于检测固定板之上，与所需的试纸条同时平放至4℃冰箱内，此时试纸条并未插入样品中。
2.2.3在15～20 min时将试纸条同时放入检测板孔中。
2.2.4将试纸与检测固定板一起水平放置于4℃冰箱内，此时不得将试纸从检测孔中取出，并保证试纸条处于平置检测孔底部状态。
2.2.5 8～10 min后判定结果。
2.3检测结果判定
2.3.1在把试纸和检测固定板同时放进4℃冰箱后开始记时。
2.3.2 8 min后取出，标准品1的反应线呈一条较清晰的棕红色线，标准品2反应线的颜色明显淡于标准品1反应线的颜色。
2.3.3 10 min将待检样品的反应线与标准品1、标准品2的反应线的颜色对比判定结果，颜色越浅，瘦肉精含量越高。
2.3.4待检样品反应线的颜色不浅于标准品1的反应线的颜色时，其瘦肉精含量判为未检出。
2.3.5待检样品的反应线颜色介于标准品1和标准品2的反应线颜色之间时，其瘦肉精含量介于标准品1和标准品2的含量之间（0～5 ng/mL）。
2.3.6待检样品反应线的颜色明显浅于标准品2反应线的颜色时，其瘦肉精含量＞标准品2中的含量（＞5 ng/mL）。
3.盐酸克伦特罗的检测方法
对畜牧产品中盐酸克伦特罗残留的检测方法很多，除采用快速试纸条进行检测外，还有以下几种主要的检测方法。
3.1生物效应测定法（Functional Test，FT）
FT检测方法是利用盐酸克伦特罗具有松弛支气管平滑肌的特性建立的。具体做法是将待检的尿液用柱层析等方法提纯净化后，滴加在猪气管条上，并采用一套装置以记录气管条的收缩与舒张活动，然后依据对气管条活动变化的记录，推算出尿液中CL的含量，最低检测限达到1mg/L。但是由于这样生物效应所有肾上腺素类物质中具有普遍性，用这种方法不能加以区分，所以此法仅适用于大批量的普查。
3.2 毛细管电泳法（CE）
随着毛细管区带电泳技术(CE)自动化操作的实现,由于其具有灵活性高、重复性好、操作简便、所需样品量极少(一般只需几纳升), CE非常适用于那些难以用传统的液相色谱法分离的离子化样品的分离与分析,为快速、批量分离和分析离子化样品提供了一个很好的选择性手段，而且其精确度、准确度均已符合生物样品中残留物的检测标准。
CE检测方法是利用毛细管作为电泳装置，可有效地拟制电泳操作过程中对流和混合的发生，分离精度极高，此外毛细管的比表面积大，散热快，设备的冷却比较容易，操作电场强度可达100-300V/cm，电泳速度快，分离时间短。选择合适的操作条件，毛细管电泳可分离迁移率相差很小的溶质混合物。
3.3高效液相色谱法（HPLC）
高效液相色谱法是近年来迅速发展起来的快速分离分析技术，在食品分析检测方面得到广泛应用。它根据所连检测器的不同，又可分为高效液相色谱法-紫外法（HPLC-UV）、高效液相色谱法-二极管阵列法（HPLC-PDA）、高效液相色谱法-荧光法（HPLC-FLU）等。HPLC法具有较高的检测灵敏度、假阳性率很小的优点，利用HPLC检测盐酸克伦特罗的文献比较多，也是比较成熟的方法之一。色谱检测法的检测灵敏度高，检测限低。我国政府部门选用高效液相色谱法来对出口产品进行验证。该方法更精确、可靠，但是需要昂贵的仪器设备，而且前处理相当复杂，只能适用于单个样品的检测，检测的成本相当高，很难同时进行大量的检测。
3.4 液相色谱-质谱联机检测法（LC-MS）
尽管HPLC法检测盐酸克伦特罗具有较高的特异性，但在检测复杂样品时，偶尔会出现假阳性，与质谱的联用不但解决了这一问题，还大大提高了检测限。液相色谱与质谱联用，可以首先将混合物分离为单一组分，之后再用质谱检测器进行检测。不仅可以得到更有意义的质谱数据，而且可以在一定程度上排除基质干扰，克服离子抑制现象，优化质谱检测信号。HPLC的分离能力与质谱检测器的丰富信息与高灵敏度，使采用质谱检测器作为HPLC检测手段的液质联用技术成为目前发展最为迅速的分析手段之一。该方法的灵敏度高、专属性强、分析速度快。
4.结语
盐酸克伦特罗的各种检测方法都存在自身的优点和缺点，各类检测方法需要进行合理运用。因此，在檢测实践中，运用者应当根据具体情况，先择适宜于本部门或当次检验的具体检测方法，以避免资源及检测设备的浪费。同时还应当继续探索更为经济实惠，且精确易操作的检测方法，以不断完善检测手段，以期切实保障动物性食品的安全性。■
【参考文献】
［１］郑冰,苏淑娴.畜产品中盐酸克伦特罗检测方法概述 [J].分析试验室.2010（S1）.
盐酸克伦特罗残留检测 第5篇
高效液相色谱法紫外电化学串联检测测定鸡肉中克伦特罗残留
1 引言 盐酸克伦特罗又称氨哮素,克喘素,用于治疗哮喘.它属于β-兴奋剂,有加速动物生长、改进脂肪型动物的肌肉与脂肪的比例的作用,但在畜牧生产中没有被作为合法的生长促进剂批准.国内外相继发生多起因食用含克伦特罗残留的动物性食品发生中毒的事件.我国己将其列为禁用的`饲料药物添加剂,并规定不得检出.本文采用高效液相色谱紫外电化学串联检测法测定鸡肉中克伦特罗残留,并进行不同的加标水平回收率实验,能够为监测提供较好的手段.
作 者：苗虹 王凌琰 吴永宁 作者单位：中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所,北京,100050刊 名：分析化学 ISTIC SCI PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY年，卷(期)：31(8)分类号：O65关键词：
盐酸克伦特罗残留检测 第6篇
以重氮反应将盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白偶联制备免疫原和检测原,通过杂交瘤技术获得了3株能分泌特异结合CL小分子的抗体杂交瘤细胞株.经竞争法ELISA分析,9E3抗体的IC50质量浓度为19.85μg/L,14C5抗体为1.65μg/L,16F4抗体为0.84μg/L.在与类似物的交叉性反应中,16F4抗体与沙丁胺醇的交叉反应性为0.26%,特布他林为0.04%,与非诺特罗、肾上腺素、去甲肾上腺素的.交叉反应性都小于0.02%.因此,所制备的抗盐酸克伦特罗的抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.
作 者：吕琦 张爱玲 王泽华 马岚 LV Qi ZHANG Ai-ling WANG Ze-hua MA Lan 作者单位：吕琦,王泽华,马岚,LV Qi,WANG Ze-hua,MA Lan(云南大学,单克隆抗体工程技术中心,云南,昆明,650091)
张爱玲,ZHANG Ai-ling(云南中医学院,云南,昆明,650032)
盐酸克伦特罗残留检测 第7篇
建立了尿液中克伦特罗和沙丁胺醇同时测定的GC-MS方法. 尿液在碱性条件下以异丁醇提取后, 用Waters Oasis MCX小柱净化, 吹干后用BSTFA进行硅烷化衍生, 采用GC-EI-MS法, 选择离子方式采集数据. 结果表明, 克伦特罗和沙丁胺醇的线性范围为0.002～1.00 mg/L, 相关系数分别为0.9993和0.9985, 方法检出限可达0.5 μg/L (S/N=10). 尿液中克伦特罗和沙丁胺醇的回收率分别为75.9%～89.2%和73.6%～89.5%, 相对标准偏差(RSD)均不大于10%.
作 者：张雪曼 程雪梅 苏青云 ZHANG Xue-man CHENG Xue-mei SU Qing-yun 作者单位：东莞市农业检验监测所,东莞,523007 刊 名：分析试验室 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANALYSIS LABORATORY 年，卷(期)：2007 26(2) 分类号：O657.6 关键词：克伦特罗 沙丁胺醇 GC-MS 动物尿液★ 罗特摆摊记五年级作文
★ 地质雷达检测技术及应用
★ 化学盐酸教案
★ 传感器与检测技术实验心得
★ 计算机软件安全检测技术分析论文
★ 为了证明盐酸和烧碱
★ 罗读后感
★ 建筑工程检测中无损检测技术的应用论文
★ 盐酸左氧氟沙星片说明书
盐酸克伦特罗残留检测 第8篇
1 检测畜产品中盐酸克伦特罗残留采用的主要方法
1.1 畜产品中盐酸克伦特罗残留检测的主要方法
液相色谱-质谱法 (LC/MS) 、气相色谱-质谱法 (GC/MS) 高效液相色谱法 (HPLC) 、毛细管区带电泳法 (CE) 、酶联免疫吸附法 (ELISA) 、胶体金免疫层析法 (GICA) 等六种方法。除此之外, 还有运用共振光散射和免疫传感技术等建立的检测方法, 但有国家或行业标准的只有LC/MS、GC/MS、HPLC、ELISA和GICA五种方法。LC/MS和GC/MS是农业部发布的盐酸克伦特罗确证检测方法, HPLC是农业部发布的盐酸克伦特罗定量检测方法, ELISA、GICA是农业部发布的盐酸克伦特罗定性和半定量检测方法。
1.2 常用检测方法的优劣比较
LC/MS和GC/MS具有高灵敏、高准确、高特异性的优点, 但存在仪器贵重、操作烦琐、试剂耗材昂贵、前处理耗费时间长, 且需要较高知识水平的操作人员等问题, 限制了LC/MS和GC/MS在基层工作中的应用。ELISA与LC/MS或GC/MS相比, 检测时间大大缩短, 一般需要几分钟到几小时, 操作和需要仪器设备简单, 仪器设备也比较便宜, 但是ELISA准确性和特异性稍差, 需进一步确证, 且因其检测试剂盒检测数量大 (一般为96孔板) 稍显贵重, 较适用于大规模多批次的检测活动, 在一定程度上限制了ELISA在基层工作中的应用。GICA与ELISA相比不需要仪器设备, 操作更简单, 检测时间更短, 试剂耗材价值更低, 且不需要高专业知识的操作人员, 不仅适用于基层大规模的检测活动, 也适用于长期的每次小批量检测活动。但是GICA灵敏度、特异性较差, 必需进一步确证。HPLC和CE的优缺点分别介于LC/MS、GC/MS与ELISA、GICA之间, 既缺乏LC/MS、GC/MS具有的高灵敏、高准确、高特异的优点, 不能确证畜产品中含盐酸克伦特罗, 又缺乏ELISA、GICA的操作简单, 检测时间短的优点, 各项缺点显得更明显, 在实际工作中已很少应用了。
2 ELISA与GICA在检测畜产品中盐酸克伦特罗残留的应用比较
2.1 ELISA与GICA测定原理
2.1.1 ELISA测定原理
ELISA是利用免疫学抗原抗体特异性结合反应和酶的高效催化作用, 通过化学方法将植物辣根过氧化物酶 (HRP) 与克伦特罗 (CL) 结合, 形成酶偶联克伦特罗, 将固相载体上已包被的抗体 (羊抗兔Ig G抗体) 与特异性的抗克伦特罗抗体结合, 然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗, 克伦特罗与克伦特罗酶标记物竞争克伦特罗抗体, 没有连接的克伦特罗酶标记物在洗涤步骤中被除去。洗涤后加入酶基质 (过氧化尿素) 和显色剂 (四甲基联苯胺) 一起孵育, 结合的酶标记物将无色的显色剂转化为蓝色的底物, 加入反应停止液后颜色由蓝色转化为黄色, 根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多, 则被结合的酶偶联克伦特罗少, 有色物量就少。用比色法测定样品中的克伦特罗含量, 比色的最佳波长为450nm, 参比波长应大于600nm。样品中吸光度值与盐酸克伦特罗浓度成反比。
2.1.2 GICA测定原理
GICA是运用竞争性抑制胶体金免疫层析原理, 以胶体金作为示踪标志物, 标记特异性盐酸克伦特罗单克隆抗体。胶体金标记就是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理是胶体金颗粒表面的负电荷与蛋白质的正电荷基团静电吸附而形成牢固结合。胶体金颗粒之间因静电作用形成一种稳定的胶体状态, 也称金溶胶。现在GICA测定畜产品中盐酸克伦特罗残留已经形成稳定的商品化检测卡, 使特异性的抗原抗体反应在经过CL-BSA偶联物和羊抗鼠抗体包被在硝酸纤维膜的试纸上进行, 形成检测线和对照线, 几分钟内就可以根据两条线颜色的深浅不同而判定检测结果。
2.2 实验环境要求
2.2.1 温度
实验室的环境对ELISA的影响较大, 环境温度太低, 抗体抗原反应会减弱甚至抑制, 可能造成在正常试验时间内反应还不完全即被加入停止液终止反应, 使得最终结果不正确, 难以形成标准曲线图;温度过高会加快抗体抗原反应, 可造成后加样的微孔里还未来得及加完试剂, 前面已加好试剂的微孔已经发生了反应, 也使得最终结果不准确。而环境温度对GICA影响不大, 一般保持在室温即可。
2.2.2光线
由于ELISA加入试剂时需要一定的时间, 在恒温孵育前光线照射已加入试剂的微孔, 检测试剂会发生变化, 造成最终结果浓度偏低。特别是某些反应是需要在暗处孵育的。但只要不是光线特弱, 光线对于GICA几乎无影响。
2.2.3 仪器
ELISA需用带有450nm波长滤光片的酶标仪且需预先设置好, 否则, 可引起检测结果不准确, 甚至形成不了标准曲线。GICA不需要检测仪器。
2.3 实验操作步骤比较
2.3.1 ELISA
首先要将需要用到的试剂和样品回到室温 (20~24℃) , 并稀释抗体, 将稀释过的抗体加入微孔板底部, 并室温孵育15min。然后经过第一次洗板后加入标准液和处理好的样品到微孔底部, 接着加入稀释过的酶标记物, 振荡, 在避光条件下室温孵育30min。再次洗板后加入发色剂, 振荡, 在避光条件下室温孵育15min。最后加入反应停止液, 在60min内用450nm波长滤光片测量OD值。单独用一个酶标板操作过程需要2h左右, 若大批量检测往往需要2~3d时间。
2.3.2 GICA
将处理好的待检样品用塑料吸管逐滴缓慢加3滴到检测孔中, 在3~5min内观察检测线判断阴阳性即可, 10min以上观察结果无效。
2.4 样品处理比较
2.4.1 带有低脂肪的肌肉、内脏、组织样本
经过均质后, 取20g装入离心管内, 盖紧管盖, 90℃加热10~15min, 取出。冷却至室温后, 去除表面漂浮的脂肪, 取清亮液体直接测定, 如果有明显的黄色浑浊, 4000r/min离心5min取上清液即可。此种处理方法ELISA和GICA均适用。
2.4.2 动物尿液
一般不需要特殊处理, 可以直接吸取上清液进行测定, 如果混合有土壤、粪便等异物可以经过4000r/min离心5min后再测定, 也可用滤纸过滤取上清液检测。尿液一般在3~5d内要检测完毕, 冷藏保存。此种处理方法ELISA和GICA均适用。但实际检测中, 生猪屠宰场一般从猪膀胱内直接取样检测。少量检测时用GICA, 批量检测时用ELISA, 可节约经费。
2.5 检测限比较
经上述处理后的ELISA检测限动物尿液一般为0.2ng/m L, 动物组织和饲料一般为0.5ng/m L和5ng/m L。市场上销售的盐酸克伦特罗胶体金检测卡检测限尿液一般是3ng/m L, 肌肉或内脏为5ng/m L, 饲料为5~10ng/m L。
2.6超检测限结果处理
ELISA检测时浓度超出最高检出限8.1ng/m L的样品, 需要不断进行稀释, 直至在检测范围内可以检测出其浓度才可确定样品的最终浓度, 且在稀释过程中也不能盲目稀释样品的倍数, 应该以较小的稀释倍数循序渐进地进行稀释。由于是半对数曲线计算浓度, 稀释后计算得到的浓度往往接近实际稀释倍数浓度的40%。因此要确保在检测范围内可以检出时使用了最小的稀释倍数, 这样测得结果的准确度才更高。用GICA检测时, 由于超出最高检测限就显现出阳性条带, 因此只能判断含量大于最高值, 不能进行定量判断。
3 结论
经过多年基层工作实践表明, 以GICA为初筛方法, 对检测结果为阳性的样品用ELISA进行再次检测的联合检测方法, 用LC/MS或GC/MS确证, 其准确率可达95%以上, 适用于基层部门开展畜产品中盐酸克伦特罗残留的检测。
参考文献
[1]李庆华, 等.盐酸克伦特罗残留检测方法研究进展[J].中国畜牧兽医文摘, 2011, 5:182-183.
[2]刘国艳, 等.检测盐酸克伦特罗含量的免疫传感器的载体膜部件的研制及效果评价[J].上海交通大学学报, 农业科学版, 2004, 22 (4) :347-349, 354.
[3]甘露, 等.共振光散射法检测肉制品中盐酸克伦特罗[J].食品工业科技, 2008 (.4) 294-296.
[4]黄小燕, 等.盐酸克伦特罗快速检测试纸条的应用探讨[J]云南大学学报自然科学版, 2008, 30 (S1) :446-449.
[5]张贵云.猪尿液中盐酸克伦特罗 (瘦肉精) 残留量检测方法比较[J].北京农业, 2010, 1:34-36.
