Vero 细胞流感疫苗应用前景（精选3篇）
Vero 细胞流感疫苗应用前景 第1篇
Vero 细胞流感疫苗应用前景
流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,其病毒基因组为单股负链分节段的RNA,外有包膜.根据病毒核壳蛋白(NP)和膜蛋白(MP)抗原特性及其基因特性的不同,分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,甲型根据其表面(HA、NA)结构及其基因特性的.不同又分为许多亚型,乙和丙型没有亚型,其中甲型和乙型流感病毒与人类有密切关联[1],如1918～19暴发的西班牙流感(H1N1)、1957年的亚洲流感(H2N2)、1968年的香港流感(H3N2)和1977年俄国流感(H1N1),每次大流行都造成了巨大的人力资源和物力资源的损失,在美国,每年平均20,000人死于流感.自1968年起大多数流感病毒的新变种都首发于中国,并且近来的研究表明,历史上的4次流感暴发,后3次出现的新亚型流感病毒均首发于中国.
作 者：吴少慧 舒跃龙 WU Shao-hui SHU Yue-long 作者单位：吴少慧,WU Shao-hui(辽宁省疾病预防控制中心,沈阳110005)
舒跃龙,SHU Yue-long(中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052)
刊 名：病毒学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY年，卷(期)：22(1)分类号：Q819 R373关键词：
Vero 细胞流感疫苗应用前景 第2篇
关键词：猪流行性腹泻病毒,Vero培养,疫苗
本实验对猪流行性腹泻病毒疫苗株在Vero细胞中的增殖规律进行了进一步探索, 以获得该疫苗株增殖的最佳条件, 从而为猪流行性腹泻病毒细胞疫苗的研究奠定基础。
1 材料与方法
(1) 毒株。猪流行性腹泻病毒疫苗株 (CV777) 由本单位提供。病毒粒子浓度为5×l08PFU/m L。
(2) 主要试剂。DMEM培养基购自Gibco公司, 进口胎牛血清购自Hyclone, 胰酶购自Washington公司。
(3) 细胞及传代培养。Vero细胞来自哈尔滨兽医研究所, 在本实验室已扩增冻存, 目前在本实验室传至130代, 已经适应在本实验室的培养基中生长。满瓶的Vero细胞用0.25%胰酶-EDTA消化脱壁后, 用10%DMEM培养基 (含10%进口胎牛血清) 终止消化并稀释到2~3×105个/m L, 在10L转瓶 (内壁表面积约为4000cm2) 中加入培养基1000m L, 细胞重新贴壁以后密度约为5~6×104个/cm2, 在37℃恒温中, 转瓶机釆用12转/h培养72h, 细胞长成单层以后密度约为4×l05个/cm2, 用于接毒或传代。
(4) PEDV在六孔板培养体系中的繁殖试验。取长满Vero细胞的六孔板 (每孔直径为3.5cm, 表面积为9.5cm2) 两块 (做两组平行对照, 分别标记为NC1组、NC2组) , 每孔细胞密度约为4×105个/cm2, 弃去培养基, 用PBS缓冲液洗涤三次, 以去除残留培养基。每孔加入200μL病毒液, 5%CO2培养箱中37°C吸附1h, 弃去病毒液, 补加维持液 (不含血清的DMEM培养基) 2m L, 胰酶浓度为5μg/m L, 每板留一孔不接毒只更换维持液作为空白对照, 接毒后置于5%CO2培养箱中37°C进行培养, 每隔12h观察细胞病变情况, 同时收取每孔的细胞培养上清, 3000rpm离心5min后放入-20°C保存, 至接毒后72h。最后收取空白对照孔细胞培养上清, 上清样冻融后, 按照Reed-Muench法计算TCID/0.1m L。
TPCK胰酶浓度对病毒在Vero细胞中增殖的影响。按照1.4步骤中摸索的初步条件, 分别在接毒后加入TPCK-胰酶终浓度为1μg/m L、2μg/m L、5μg/m L、7.5μg/m L、10μg/m L和不加胰酶6组接毒试验, 每组做2组平行。比较各组结果, 以确定TPCK-胰酶对病毒在Vero细胞中增殖的最佳浓度。
接毒量对病毒在Vero细胞中增殖的影响。在最佳TPCK胰酶浓度条件下, 分为4个不同接毒剂量组, 分别病毒粒子浓度为5×108PFU/m L的病毒, MOI分别为1、0.1、0.01、0.001每个接毒剂量设置2个平行对照组, 设1组只更换维持液无病毒的空白对照, 比较各组结果, 以确定最佳接毒剂量。
(5) PEDV在10L转瓶中增殖试验。根据在6孔板中探索的最优条件, 接毒后10L转瓶的维持液体积为1000m L。共接毒3个10L转瓶, 接毒后每隔12h收取细胞培养上清, 3000rpm离心5min后放入-25℃保存, 直至接毒后72h, 上清样品冻融后, 按照按Reed-Muench法计算TCID/0.1m L。
2 结果
2.1 六孔板病毒增殖试验结果
(1) 细胞病变情况。接毒后每隔12h观察细胞病变, 发现接毒后18h少数细胞病变, 24h后细胞出现明显病变, 细胞肿胀变圆, 折光性增加, 颗粒物质增多, 培养后期出现细胞脱落。
(2) 六孔板中病毒增殖试验结果。接毒后采取的细胞培养上清进行毒价检测, 结果见表1。在接毒后60h病毒增殖滴度达到峰值1×106.3TCID50/0.1m L, 空白对照无病变。峰值可维持12h、72h以后病毒效价略有下降。
(3) 接毒量对病毒在Vero细胞中增殖的影响结果。对保存的10L转瓶中Vero细胞接毒样品进行TCID50检测, 空白对照组无病变, 其余各组检测结果见图2。接毒量MOI为0.1、1时病毒均能获得较好的增殖, 病毒效价峰值均可以达到1×106.5TCID50/0.1m L, 而当接毒量小于0.1时, 病毒的感染量较低, 效价上升速度慢, 最终未能达到峰值。
(4) 胰酶浓度对病毒在Vero细胞中増殖影响的结果。对加入不同浓度胰酶条件下病毒增殖检测结果见图3。当胰酶浓度低于5μg/m L, 病毒增殖速度明显减慢, 毒价未能达到峰值, 当胰酶浓度为7.5μg/m L时, 病毒增殖较稳定, 毒价能达到峰值。当胰酶浓度达到10μg/m L时, 细胞很快在3~4h内被胰酶消化脱落, 因此病毒无法增殖, 表明该疫苗株在Vero细胞中增值的最佳胰酶浓度为7.5μg/m L。
2.2 PEDV在10L转瓶中增殖试验结果
对3个10L转瓶中Vero细胞的接毒试验样品进行病毒效价检测, 结果见图4。接毒后12h即可检测到病毒效价, 随时间延长逐渐上升, 在60h能达到最高, 且峰值可以维持到72h, 之后开始下降。
3 讨论
本试验对PEDV疫苗株在6孔板和10 L转瓶大规模增殖的条件进行了研究, 在比较试验结果后确定胰酶终浓度为7.5μg/m L作为该疫苗株大规模增殖的最佳浓度;最佳接毒剂量选择MOI=1, 在此条件下病毒增殖最高毒价均可以达到106.0/0.1m L以上, 充分说明该疫苗株具有高度适应在Vero细胞大规模增殖的特性, 为该疫苗株应用于大规模生产提供了依据。
本试验在确定最佳胰酶终浓度时发现, 该疫苗株在Vero细胞大规模增殖过程中, 胰酶的加入是必不可少的。同时在对加入不同胰酶浓度进行比较中发现, 在浓度为5~7.5μg/m L范围内病毒增殖速度随胰酶浓度的增加上升。这是因为PEDV毒株不同而引起对胰酶的敏感性有所差异。另外不同代次Vero细胞对病毒增殖的敏感性不同也是引起病毒增殖对胰酶依赖性不同的重要因素。
参考文献
[1]徐国栋, 李峰, 张广峰.国内猪流行性腹泻防治概况.畜牧与兽医, 2011, 43:88-93.
[2]张世忠, 江斌.2011年福建省猪流行性腹泻的流行特点及其防治措施.福建畜牧兽医, 2012, 34:23-25.
咋合理地应用流感疫苗 第3篇
流感疫苗是一种失去活性的病毒，人们在注射流感疫苗后不会引发感冒，只是注射部位在一两天内会有酸酸的感觉。由于流感疫苗在注射6～8周后才能发挥作用，因此，人们最好在感冒流行季节到来的两个月前注射流感疫苗。
通常，各个国家的卫生部门每年都必须预测当年感冒病毒流行的类别，以生产出这一年的流感疫苗供本国居民使用。由于每个国家的流感病毒都不太一样，所以各国的感冒疫苗也不尽相同，除非全球同时流行同一种感冒。目前，按时注射流感疫苗已经成为很多人的一种健康观念。但也有人认为只有老年人才需要注射流感疫苗，年轻人是不需要注射流感疫苗的。其实这种观念是不正确的。专家建议，下列人员最好在指定的时间内注射流感疫苗：①从事临床的医务人员；②长期照顾慢性病患者的人员；③警察、消防人员、军人等需要提供社会服务的人员；④65岁以上的老人；⑤患有贫血、自体免疫性疾病、糖尿病、心脏病、肝病、肾病或癌症等慢性病的人；⑥经常服用阿司匹林的6个月至18岁的人。
